Гибридизация ДНК: понятие, определение, этапы развития и применения
Опубликованно 24.12.2018 00:52
Что лежит в основе ДНК-гибридизации? Хотя двухцепочечная ДНК -последовательность изменения этих условий в лаборатории (обычно при увеличении температуры окружающей среды) приводит в целом стабильным в физиологических условиях к тому, что молекулы разделенные на отдельные нити. Последние являются взаимодополняющими друг друга, можно. но и в качестве дополнения к другим последовательностям, которые в вашей среде Понижение температуры окружающей среды позволяет Dona молекул that или «скрещиваются» между собой. Это метод ДНК-гибридизации.
Концепция с точки зрения молекулярной биологии
Ученые, такие как ДНК-репликации и транскрипции ДНК в РНК, полагаться на пересечение между собой нуклеотиды и методы молекулярной биологии. Это Южная кровь и Носа-кровь, полимераза включает цепной реакции (ПЦР) большинство подходов для беременных гибридизации ДНК и РНК.
Применение
Гибридизация является основным свойством нуклеотидных последовательностей и, во многих методов молекулярной биологии. Генетическая связь обоих видов может быть определена путем гибридизации их сегментов ДНК (ДНК-ДНК-гибридизации). Из-за сходства между последовательностями скромные организмы имеют более высокую температуру для плавки таких ДНК-гибридов требует по сравнению с более дальних организмов. Использовать различные методы иврит для определения происхождения образец ДНК, в том числе полимеразной цепной реакции (ПЦР). В другом методе-коротких последовательностей ДНК гибридов с клеточной мРНК для идентификации Expression гены. Фармацевтические компании изучают возможность использования Animal для связывания РНК с нежелательной мРНК, рибосома препятствует перевода мРНК в белок.
ДНК-ДНК-гибридизации, как правило, ссылается на метод молекулярной биологии, который измеряет степень генетического сходства между бассейнами ДНК-последовательностей. Он обычно используется для определения генетического расстояния между двумя организмами. Он широко используется в филогении и таксономии. Методика
ДНК организма называется, затем смешивается с не сделать ДНК, что можно с ней сравнить. Смесь инкубируют, чтобы ДНК-связанные цепи и диссоциируют затем охлаждают с образованием возобновленной двуцепочечной гибридной ДНК. Гибридизации последовательностей с высокой степенью сходства будет общаться более упругой и требуют больше энергии, чтобы отделить их: т. е. вы будете.при нагреве при более высоких температурах, чем гетерогенных последовательностей, процесс, известный как «плавление ДНК» Плавление ДНК
Оценивая профиль плавления гибридов ДНК, двухцепочечную ДНК связывают с так называемой "колонки", и полученную смесь нагревают. На каждом этапе колонну промывают, и ДНК-последовательности, плавленных одноцепочечными и мыть столб. Температуры, при которых выделенная ДНК идет из динамика, который отражает количество сходства между последовательностями (и образец Замбия служит в качестве контроля). Эти результаты объединяются, чтобы степень генетического сходства между организмами. Как утверждает современная микробиология, ДНК-гибридизация невозможна без понимания этих вещей.
Если несколько видов РНК (или дизоксирибонуклеиновой) кислот сравниваются, таким образом, значения сходства размещение видов dar позволяют в филогенетическом дереве. Поэтому один из возможных подходов для проведения молекулярной систематики. Чарльзом Сибли и Джоном Elvis, пионеры этого метода использовали ДНК-ДНК-иврит для изучения филогенетического отношения птиц (классификация Сибли-ELISA) и приматов. Значение для биологии
ДНК-ДНК-гибридизации золотой стандарт для различения сходства бактериальных видов с размером более 70%, что означает, что сравниваемые штаммы принадлежат к разным видам. В 2014 году порог 79% сходства для разделения бактериальных подвид был предложен.
Критики утверждают, что метод недостаточно точен для сравнения родственных видов, так как любая попытка измерить различия между местные последовательностей между организмами гибридизации Perla аналоги перегружен в геноме организма. ДНК-секвенирование и сравнительный анализ последовательностей в настоящее время, как правило, являются метод определения генетического расстояния, чтобы определить хотя этот подход все еще используется в микробиологии для бактерий.
Современный метод заключается в проведении гибридизации ДНК-ДНК в силиконе полностью или частично беременных геномов. GGDC, разработанный в DSMZ, является наиболее известным инструментом для расчета DDH-аналогичных ценностей. Среди других алгоритмических улучшений он решает проблему с Policy последовательности, тщательно просеивает из соответствия между двумя последовательностями генома.
Метод FISH
Флюоресцентной гибридизации молекул ДНК (Fluorescence In Situ Hybridization - FISH) является лабораторным методом обнаружения и определения ДНК-последовательности, часто на определенной хромосоме.
В 1969 году Джозеф и Мэри Лу Gall Перу опубликовали документ, подтверждающий, что радиоактивные копии последовательности рибосомной ДНК может быть использован для обнаружения комплементарных последовательностей ДНК в клеточном ядре слушаю яйца. Начиная с этих оригинальных наблюдений, много уточнений, повышает гибкость и чувствительность метода до такой степени, что in situ гибридизации ("на своем месте", латинский) в настоящее время считается важным инструментом в Kitchenette. (Термин in situ сейчас даже первую фазу роста железы назначают, если в патологический процесс вовлечена только эпителиальная ткань.)
Порядок флюоресцентной гибридизации
РНК-зонды могут быть сконструированы таким образом, для каждого гена или любой последовательности внутри гена для визуализации мРНК lncRNA и микроРНК в тканях и клетках. ФИШ будет аномалий путем изучения клеточного цикла воспроизводства, в частности interfazy ядер для всех хромосом. FISH анализ позволяет широкий ряд архивных случаях, гораздо проще идентификационный идентифицировать хромосомы, в результате чего зонд с искусственным хромосомные базы, которые привлекают подобные хромосом.
Сигналы для каждого зонда гибридизации, когда обнаруживается аномалия ядра: каждый зонд для детекции мРНК и lncRNA состоит из 20 пар олигонуклеотидов, причем каждая пара занимает пространство в 40-50. П. Для обнаружения мРНК-зонда использовать запатентованное химии.
Гибридизация с ДНК-зондами
Зонды часто получают из фрагментов ДНК, которые были изолированы, очищены и репликации для использования в формировании генома человека. Размер генома человека настолько велика по сравнению с длиной, может беременных сразу, что надо разделить его на фрагменты. В конечном итоге эти куски были.в порядке путем переваривания копии каждого фрагмента в еще более мелкие элементы с использованием бесконечные специфичным для последовательности, для измерения размера отдельных небольших фрагмента с использованием экскурсия хроматографии, используя эту информацию, чтобы определить, где большие участки перекрывают друг друга
Для сохранения элементов с учетом их индивидуальных последовательностей фрагментов ДНК в периодическая система популяций бактерий. Клонов популяции бактерий, каждая популяция, поддерживающая единую искусственную хромосому, в различных лабораториях по всему миру. Искусственные хромосомы (BAC) может извлечь выращивают, и выделить в любой лаборатории, библиотека. Геномные библиотеки часто называют в честь учреждений, в которых они были разработаны. Примером может служить библиотека RPCI-11, названный в честь Cancer Institute в Буффало-Розуэлл (Нью-Йорк, США). Эти фрагменты порядка 100 тысяч базовых пар и являются основой большинства FISH зондов. Автор: Ольгерд Семенов 17. Октябрь 2018
Категория: Студентам